Abstract
Introduzione: la formazione di aggregati di cellule insulino (IPC) e glucagone (GPC) secernenti, differenziate da cellule staminali circolanti (CSC), potrebbe fornire un’alternativa al trapianto di isole pancreatiche native. Nel tentativo di potenziare la produzione di cellule ormone-secernenti dalle CSC abbiamo testato l’effetto di betatrofina ed Exendina-4 sul differenziamento di cellule IPC e GPC e sulla formazione di sferoidi. Materiali e Metodi: CD34+ isolate da sangue periferico di 20 donne gravide sono state differenziate in presenza o assenza di betatrofina (BT, 10 μmol/l) e/o Exendina-4 (EXE, 10 nmol/l). IPC e GPC sono state identificate con tecnica colorimetrica e di immuno-fluorescenza previa verifica della vitalità e formazione di sferoidi su micropiastre per coltura cellulare 3D. L’espressione genica di insulina e glucagone è stata misurata con Real-Time PCR. Gli sferoidi sono stati esposti a varie concentrazioni di glucosio per la determinazione del rilascio di insulina e glucagone (IRMA e RIA). Risultati: rispetto al differenziamento di controllo (CTRL: IPC 4,4E+4±1,2E+3; GPC 5,8E+4±2,2E+3, BT (4,9E+4±2,5E+3 e 3,2E+5±3,6E+4), EXE (6,9E+5±4,5E+4 e 1,7E+5±2,6E+4) e BT+EXE (5,3E+5±1,5E+4 e 5,8E+5±4,6E+4) indicevano un modesto e variabile aumento del numero di cellule. Di contro, l’espressione genica di glucagone e insulina era potenziata da BT (15,8±7,72^-ΔCt e 28,4±6,82^-ΔCt, rispettivamente), EXE (25,6± 6,02^-ΔCt e 15,6±4,82^-ΔCt) e BT+EXE (23,6±3,72^-ΔCt e 22,1±5,42^-ΔCt), rispetto a CTRL (5,1±2,42^-ΔCt e 1,6±0,82^-ΔCt; tutto p<0,05). Negli sferoidi trattati con BT+EXE l’esposizione a glucosio (1.1 e 16.7 mM) determinava un significativo (p<0.05) incremento percentuale di glucagone (98±14%) e insulina (91±9%) rispetto alla condizione con glucosio 3.3 mM. Conclusioni: questi risultati preliminari mostrano che sferoidi formati da cellule IPC e GPC possono essere ottenuti a partire da cellule CD34+ ematopoietiche circolanti. BT ed EXE non esercitano significativi aumenti del numero di cellule endocrinosecernenti ma potenziano l’espressione genica di insulina e glucagone con segni di riposta alle variazioni di glucosio nel terreno di coltura.
Tipo: PD
Codice: 15